HPLC-SEC法测定中药注射剂中残留大分子蛋白含量的研究

中国药物评价 ›› 2025, Vol. 42 ›› Issue (3): 196-199.

HPLC-SEC法测定中药注射剂中残留大分子蛋白含量的研究

齐越¹，鄢长余²，姜范成²，夏春鹏³，赵月然^2*

1.江苏省徐州医药高等职业学校药学技术系，江苏徐州 221116；
2.大连市检验检测认证技术服务中心，辽宁大连 116021；
3. 辽宁中医药大学药学院，辽宁大连 116600

收稿日期:2025-05-08 修回日期:2025-05-27 接受日期:2025-07-29 出版日期:2025-06-28 发布日期:2025-08-05
基金资助:
江苏省药品监督管理局科研计划课题（202305）

Determination of Macromolecular Protein Residues in Traditional Chinese Medicine Injections by HPLC-SEC

QI Yue¹， YAN Changyu²， JIANG Fancheng²， XIA Chunpeng³， ZHAO Yueran^2*

1.Department of Pharmacy， Jiangsu Provincial Xuzhou Pharmaceutical Vocational College， Jiangsu Xuzhou 221116， China；
2.Dalian Center For Certification and Food and Drug Control， Liaoning Dalian 116021， China；
3.School of Pharmacy， Liaoning University of Traditional Chinese Medicine， Liaoning Dalian 116600， China

Received:2025-05-08 Revised:2025-05-27 Accepted:2025-07-29 Online:2025-06-28 Published:2025-08-05

摘要/Abstract

摘要： 目的：建立高效液相色谱-体积排阻法 (HPLC-SEC)测定中药注射剂中大分子蛋白残留量的检查方法。方法：采用TSK GEL G2000SWxl (7.8 mm×300 mm，5 μm)凝胶色谱柱，以乙腈-0.08%三氟乙酸(5∶95， v/v)为流动相，流速0.8 mL·min-1，柱温35 ℃，检测波长214 nm。结果：选用蛋白对照品血清白蛋白（牛）、溶菌酶、人胰岛素、胸腺肽α1进行方法验证，其分子量分布为66 400~3 108 Da。以溶菌酶为对照品计算中药注射液中大分子蛋白的相对含量，结果显示，溶菌酶在0.381 2~3.812 μg浓度范围内线性关系良好（r＞0.999），精密度、稳定性、重现性良好（RSD≤2.0%）。对5批中药注射剂样品进行测定，其中2批样品检出大分子蛋白残留，含量为25.7 μg·mL-1和32.6 μg·mL-1。结论：建立的HPLC-SEC方法操作简单，灵敏度高，重复性好，适用于中药注射液中大分子蛋白的限量检测，为控制中药注射液质量，提高其临床用药安全性提供了有效手段。该方法可为中药注射剂制备工艺优化和质量标准提高提供参考依据，具有较好的应用价值。

关键词: font-size:medium, ">高效液相色谱-体积排阻法；中药注射剂；离心过滤；大分子蛋白残留；溶菌酶

Abstract: Objective： To establish a HPLC-SEC method for determination of macromolecular protein residues in traditional Chinese medicine injections(TCMIs). Methods： The analysis was performed on the TSK GEL G2000SWxl (7.8 mm×300 mm， 5 μm) column at the temperature of 35 ℃.The mobile phase was composed of acetonitrile and 0.08% trifluoroacetic acid(5∶95， v/v). The flow rate was 0.8 mL·min-1 and the detection wavelength was set at 214 nm. Results： The protein reference substances were used to validate the method， including serum albumin (bovine)， lysozyme， insulin human and thymic peptide α1. The molecular weight range of the proteins was 66 400-3 108 Da. The linear relationship was good in the range of 0.381 2-3.812 μg (r>0.999) as lysozyme was used as the reference substance to calculate the relative content. The precision， repeatability， and stability of the method were good(RSD≤2.0%). The relative content of macromolecular protein was detected in 2 out of 5 batches of TCMIs and the content was 25.7 μg·mL-1 and 32.6 μg·mL-1. Conclusion： The HPLC-SEC method was simple， sensitive and reproducible， and can be used for the determination of macromolecular protein residues in TCMIs. It provided an effective method for governing the quality of TCMIs.

Key words: font-size:medium, ">High-performance size exclusion chromatography (HPLC-SEC)； Traditional chinese medicine injections (TCMIs)； Centrifugal filter； Macromolecular protein residues； Lysozyme

中图分类号:

齐越, 鄢长余, 姜范成, 夏春鹏, 赵月然. HPLC-SEC法测定中药注射剂中残留大分子蛋白含量的研究[J]. 中国药物评价, 2025, 42(3): 196-199.

QI Yue, YAN Changyu, JIANG Fancheng, XIA Chunpeng, ZHAO Yueran. Determination of Macromolecular Protein Residues in Traditional Chinese Medicine Injections by HPLC-SEC[J]. CHINESE JOURNAL OF DRUG EVALUATION, 2025, 42(3): 196-199.

参考文献

[1] 谭乐俊，王萌，朱彦. 中药注射剂的不良反应研究进展 [J]. 中国中药杂志，2014，39(20)：3889-3898.
     [2] 王雪，李家春，张伟，等. 体积排阻色谱法测定热毒宁注射液中高分子物质[J]. 中草药，2013，44(11)：1412-1415.
     [3] 彭国平，李存玉.中药注射剂安全性的分析与思考[J]. 南京中医药大学学报，2019，35(6)：744-751.
     [4] 易艳，李春英，赵雍，等. 中药注射剂不良反应及类过敏反应研究进展[J]. 中国中药杂志，2021，46 (7)：1711-1716.
     [5] 徐梦婕，陈华英，洪敏，等.基于RBL-2H3与P815细胞体外模型的聚山梨酯80、维生素K1注射剂注射用两性霉素B脂质体类过敏反应潜在风险评价[J]. 药物评价研究，2023，46(5)：952-961.
     [6] 杨艺帆，谢家骏，陈锰，等. 中药注射剂类过敏反应机制的研究进展[J]. 中成药，2019，41(8)：1935-1940.
     [7] 谷旭放，黄宇虹.中药注射剂类过敏反应研究进展[J]. 天津中医药大学学报， 2018， 37(2)：96-99.
     [8] 陈梦，李伟，王雪，等.药物类过敏反应发生机制及临床前评价方法研究进展[J]. 中国新药杂志，2017，26(1)： 51-59.
     [9] 柯瑾，张陆勇，殷华，等. 大分子物质对中药注射剂的安全性影响[J]. 中成药，2014，36（4）：855-859.
     [10] 段为钢，张陆勇.提高中药注射剂安全性的技术策略[J]. 中成药，2012，11(34)：2201-2205.
     [11] 邓国艳，米惠，刘红宇，等.基于VOSviewer和CiteSpace对中药注射剂类过敏反应研究热点和趋势的可视化分析[J]. 中草药，2024，55(3)：904-918.
     [12] 郭静，杨玉晴，李春晓，等.443例舒肝宁注射液的药品不良反应/事件文献分析[J]. 中国医院用药评价与分析，2025，25(1)：102-110.
     [13] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（四部）[S]. 北京：中国医药科技出版社，2020：285-286.
     [14] 夏恒，范楠，李月，等.中药注射剂蛋白质和鞣质检查方法的改进[J]. 中医药导报，2020， 26(1)：15-38.
     [15] 白光灿，马恺悦，王安冬，等.两步凝胶法限量检查中药注射剂中的大分子蛋白质[J]. 药物分析杂志，2018，38(2)：313-318.
     [16] 李玉彩，李响明，王文鹏，等.舒血宁注射液中蛋白质的含量测定研究[J]. 亚太传统医药，2020， 16 (5)：53-55.
     [17] 谷丹华，张俐，李家春，等.中药注射剂中大分子物质筛查方法研究 [J]. 中国药学杂志，2014，49(1)：64-67.
     [18] 李莉，李春，华文浩，等. HPMEC-ELSD法检测注射用益气复脉（冻干）大分子物质 [J]. 天津药学，2024，36(2)：10-14.
     [19] 祖金玥，冯孟鑫，王小红，等.聚山梨酯80对药典方法检查中药注射剂蛋白的影响[J]. 中国药品标准，2015，16（1）：36.
     [20] 尹利辉，范可青，朱俐，等.凝胶色谱-蒸发光散射检测法检测中药注射剂中吐温80的含量 [J]. 药物分析杂志，2012，32(9)：1686-1689.